Protein G 结构

  

链球菌蛋白G（SPG）是链球菌表面的一种细胞壁蛋白，由于其广泛地结合各种IgG，可谓之"免疫界的全能王"，其由近 600 个氨基酸组成，其N端部分为白蛋白结合域，C端部分是 IgG 结合域和细胞壁结合域。

SPG由A、B、C三个结构区组成：A、B区能够同IgG Fab段及血清白蛋白结合，降低了SPG对IgG结合的特异性，C区为SPG同IgG的Fc段结合区，由C1、C2和C3三个同源结构域。

链球菌蛋白G结构示意图

Protein G可以与IgG的Fc片段中重链CH2和CH3连接处的一段氨基酸序列产生特异性结合，此外还可以与Fab片段中CH1区域进行结合，但亲和力相对较弱。

    

Protein G结合IgG示意图  

 

Protein G与IgG结合的三维示意图

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Protein G 优势

  

Protein G能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质，Protein G比Protein A对IgG的亲和力更强，并且结合抗体的类型也相对更多，比如可以结合人IgG3、小鼠IgG1、大鼠IgG、羊IgG等，一种蛋白即可满足多物种的IgG的分离，无需满大街地找各种二抗，实实在在的“万金油”工具。

 

 

Protein G 应用

   

将Protein G蛋白共价偶联至固相载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂，可从发酵液，动物腹水或血清中纯化IgG及其亚类，一步纯化，纯度即可达到90%以上。

Protein G偶联至磁珠，从样本中分离出抗原-抗体复合物，可应用于免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或染色质免疫沉淀(Ch-IP)等实验，为IP、Co-IP和ChIP 实验提供了一种快速便捷的方法。

在免疫沉淀技术中加入特异性抗体前，先加入protein G微球到细胞裂解液，可以有效去除或减少非特异性背景。

 

 

 

 

 

 

贝茵莱研发生产出两种高质量的his-SPG(RPH00051)和his-SUMO-SPG (RPH00052)重组蛋白，两种蛋白通过基因优化和改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的的氨基酸序列，去除了白蛋白和细胞壁胞结合位点，从而有效减少非特异性结合，而且多项实验数据表明其能够与多种类型IgG的特异性结合，是一种强有力的工具蛋白。

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SDS-PAGE分析两种SPG纯度

  

由于两种SPG均带有his纯化标签，采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化两种SPG，纯化的蛋白经SDS-PAGE分析，纯度很高，均大于95%。

 

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固定化SPG对IgG分子的捕获作用

  

为研究protein G的捕获IgG分子能力，将两种重组SPG包被于96微孔板再加入梯度稀释的抗NGAL的兔多抗、鼠单抗和兔抗血清，研究固定化SPG对抗体IgG分子的捕获能力，如图所示，两种SPG对低浓度的IgG也有很好的捕获作用，最低IgG检出浓度可以达到2.5ng/mL。

 RPH00051 点击货号即刻了解

 

左：Capture signal of Imobilized his-SPG with different concentrations of Immunoglobulin G

Coated protein G: 2 ug/mL,biotinylated NGAL protein(1:2000)，avdin-HRP 1:5000

右：Effect of OD450 with different dilution factors of rabbit antiserum

Coated protein G: 2 ug/mL, biotinylated NGAL protein(1:2000),avdin-HRP 1:5000

 RPH00052 点击货号即刻了解 

 

左：Capture signal of Immobilized his-SUMO-SPG with different concentrations of Immunoglobulin G

Coated protein G: 2 ug/mL, biotinylated NGAL protein(1:2000), avdin-HRP 1:5000

右：Effect of OD450 with different dilution factors of rabbit antiserum

Coated protein G: 2 ug/mL, biotinylated NGAL protein(1:2000), avdin-HRP 1:5000

 

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游离SPG和不同类型IgG的结合反应

  

为评估SPG与IgG亲和力，将两种SPG分别标记生物素，检测游离的SPG与小鼠的IgG1、IgG2a、Ig2b以及兔IgG结合反应，对生物素化his-SPG (RPH00051)和his-SUMO-SPG(RPH00052)检出灵敏度低至0.524pmol/L和0.667 pmol/L，两种SPG不仅都能与各种类型的IgG结合而且显示其都具有超高亲和力。

Detection of biotinylated 

his-SPG (RPH00051) and his-SUMO-SPG(RPH00052)

 using different types of antibodies

Coated antiboy: 1 mg/mL, avdin-HRP 1:5000

贝茵莱坚持自主研发，为客户提供

两种高纯度、高活性的protein G蛋白

且经过内部严格质量控制

为生物科研和工业应用保驾护航

 

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