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如何选择蛋白Marker?

人阅读 发布时间:2024-05-10 09:28

 

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蛋白质研究助手

蛋白Marker干货知识

 

Bioswamp

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蛋白Marker不仅是实验成功的关键要素,更是蛋白质研究中的得力助手。它们帮助研究者快速、准确地定位、鉴定和分析蛋白质样品。在这一期推文中,我们将为各位科研伙伴详细介绍蛋白Marker的方方面面

 

 

PART 01

什么是蛋白Marker?

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蛋白Marker,即蛋白质分子量标准。

它如同一把精准的“尺子”来指示蛋白条带所对应的分子量大小。具有可指示代测蛋白分子量大小、显示蛋白在凝胶上的电泳进度、判断转膜效率、协助标记各泳道加样顺序的作用。

 

因此,选择正确的蛋白Marker对于实验的成功至关重要。

 

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电泳过程

 

 

 

PART 02

蛋白Marker的分类

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蛋白Marker主要分为非预染Marker和预染Marker。

 

非预染蛋白Marker

几种已知分子量的纯化蛋白预混液,没有附带染料分子或者是标记分子。

 

优点

缺点

所示大小正好是蛋白原本的大小,可以精确判断蛋白大小,方便不同大小的蛋白比较。

电泳过程中完全看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示参照作用。

 

 

预染蛋白Marker

预染蛋白Marker是纯化好的一些蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。

 

优点

在电泳&转膜过程中有多种预示参照作用

1. 当目标蛋白进入最佳分辨区时,停止电泳以得到最佳分辨效果

2. 当观察Marker电泳异常也可以及时终止电泳

3. 在转膜过程中检测转膜效率,并在膜上标记蛋白分子量

缺点

在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白

 

 

PART 03

预染蛋白Marker分类

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单色预染蛋白Marker

利用加倍其中某些样本的浓度来加深条带粗细,从而提示大小,方便我们快速记忆和区分各个条带的大小。

 

多色预染蛋白Marker

利用不同颜色来区别不同条带,更加好辨认。

 

 

PART 04

蛋白Marker的选择

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明确实验目的

下列情况,建议选择预染蛋白Marker:

①电泳过程中观察蛋白电泳情况

②电泳过程后观察蛋白分子量

③区分大小相近的条带

 

考量维度

①分子量范围

②条带准确性

③稳定性

④与膜的亲和性

 

 

贝茵莱产品简介

Bioswamp

彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)

PW9211

*点击上方货号查看产品详情

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彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa)是一种即用型试剂,使用前无需煮沸,含有10种覆盖广泛分子量(10~180 kDa)的预染色蛋白质,包括70kDa的橙色参考带和10kDa的绿色参考带。

 

可用于在SDS-PAGE中监测蛋白质分离、验证蛋白质印迹转移(PVDF、尼龙或硝化纤维素膜)以及蛋白质的近似大小。

 

【推荐上样量】

①Western Blot:3-5 μL/泳道
②SDS-PAGE:1-2 μL/泳道(12 孔胶);2-3 μL/泳道(10 孔胶)

 

Bioswamp

彩色预染蛋白Marker(10-250 kDa,双色)

PW9213

*点击上方货号查看产品详情

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彩色预染蛋白Marker(10-250 kDa)是一种即用型试剂,使用前无需煮沸,含有11种覆盖广泛分子量(10~250 kDa)的预染色蛋白质,包括 70kDa和25kDa 两条结合红色染料的参考带。

 

①可运用于监测电泳过程中蛋白分离情况和 Western Blot实验中的转膜效率以及判断目标蛋白的分子量。

②可用于在 SDS-PAGE 中监测蛋白质分离、验证蛋白质印迹转移(PVDF、尼龙或硝化纤维素膜)以及蛋白质的近似大小。

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【推荐上样量】

SDS-PAGE:0.75~1.0mm凝胶,上样5μL/孔;1.5mm凝胶,上样10μL/孔。也可根据情况适当减少加样量。

注:加样前在室温放置数分钟,解冻后,轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀

 

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