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流式课堂 | 流式实验配色技巧及方案
人阅读 发布时间：2024-01-18 09:29
/ 流式配色Tips /
要想流式实验不翻车
流式配色的这些Tips一定要注意！
1
✦
细胞亚群的确定
根据实验目的，确定细胞的亚群。
淋巴细胞亚群分析
2
✦
仪器的配置
了解实验所用流式细胞仪的配置信息，包括但不限于：激光器、检测通道。
激光器
检测通道
● 流式细胞仪可同时检测多种荧光，而荧光之间可能存在干扰。
因此，我们需要通过流式细胞仪的通道信息确定荧光素的选择范围，并在之后的搭配中尽量避免干扰。
● 确定荧光素的选择范围后，了解荧光素信息，并确认荧光素的激发波长、发射波长、接受该荧光的滤光片等信息与流式细胞仪的通道一致。
3
✦
染料的选择
● 染料的亮度。
不同染料之间荧光亮度不同，可通过染色指数进行对比，染色指数越高，亮度越高。
● 遵从强弱搭配原则。
荧光本身有强弱之分，可视抗原表达强弱及分群情况选择合适的荧光。
抗原表达弱或分群不明显的建议选择强荧光例如：PE、APC；反之，抗原表达强或分群明显的建议选择最常用的弱荧光例如FITC。
*常用荧光强弱排序程度为：
BV>PE>APC>PE-Cy5>PerCP-Cy5.5>FITC
● 当不同通道染料需要搭配。
选择发射光谱重叠尽量小的染料。
相信在Get了这些配色Tips之后
大家的实验可以更顺利地进行了~
当然，莱莱整理了一份流式配色大全
一一对应更加简单，快来码住吧！
/ 流式配色搭配 /
1
✦
小鼠免疫亚群panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞 表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BV421 |
| CD4 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
BV605 |
| CD8 |
杀伤性T细胞 表面抗原 |
FITC或 BB515 |
| CD19 |
B淋巴细胞 表面抗原 |
PE |
| NK1.1 |
NK细胞 表面抗原 |
APC |
| CD11b |
髓系细胞 表面抗原 |
Percpcy5.5 |
| Ly-6c |
单核细胞 表面抗原 |
pe-cy7 |
| Ly-6G |
粒细胞 表面抗原 |
BV510 |
| CD11c |
跨膜糖蛋白 |
BV786 |
| F4/80 |
成熟小鼠 巨噬细胞标志物 |
BV650 |
2
✦
小鼠T细胞亚群panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BV421 |
| CD4 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
BV605 |
| CD8 |
杀伤性T细胞 表面抗原 |
FITC或 BB515 |
| CD62L |
表达在T细胞表面 |
PE-CY7 |
| CD44 |
小鼠T细胞 活化分型指标 |
PE |
3
✦
小鼠Th细胞panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞 表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BV421 |
| CD4 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
BV605 |
| IFN-g |
Th1胞内表型抗原 |
percpcy5.5 |
| IL-4 |
Th2胞内表型抗原 |
PE-CY7 |
| IL-17 |
Th17胞内表型抗原 |
PE |
| CD25 |
调节性T细胞 表面特征性抗原 |
BB515 |
| FOXP3 |
Treg特异性标志物 |
AF647 |
4
✦
小鼠DC成熟panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD11b |
髓系细胞表面抗原 |
FITC |
| CD11c |
DC细胞成熟标志 |
PE |
| I-A/I-E |
DC细胞表面抗原 |
APC |
| CD80 |
DC细胞表面 共刺激分子 |
BV421 |
| CD86 |
DC细胞表面 共刺激分子 |
PE-CY7 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
5
✦
小鼠CD8T细胞功能panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞 表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞 表面抗原 |
BV421 |
| CD8 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
FITC或BB515 |
| IFN |
细胞功能Tc细胞 胞内抗原 |
percpcy5.5 |
| Granzyme B |
细胞毒性Tc细胞 胞内抗原 |
PE |
| Perforin |
细胞毒性Tc细胞 胞内抗原 |
APC |
| PD-1 |
耗竭亚型Tc细胞 胞内抗原 |
BV605 |
| Ki-67 |
细胞周期 增殖核内抗原 |
PE-CY7 |
6
✦
小鼠巨噬极化panel
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD11b |
髓系细胞表面抗原 |
FITC |
| F4/80 |
成熟小鼠 巨噬细胞标志物 |
BV650 |
| CD86 |
巨噬细胞M1型 表面抗原 |
PE-CY7 |
| CD206 |
巨噬细胞M2型 表面抗原 |
APC |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
7
✦
人免疫亚群
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BB515 |
| CD4 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
BV421 |
| CD8 |
杀伤性T细胞 表面抗原 |
BV510 |
| CD19 CD20 |
B淋巴细胞 表面抗原 |
bv605 |
| CD56 |
NK细胞表面 特异性抗原 |
APC |
| CD14 |
单核细胞表面抗原 |
pe-cy7 |
| CD16 |
NK细胞表面抗原 |
BV786 |
| CD15 |
成熟粒细胞表面抗原 |
Percpcy5.5 |
| HLA-DR |
DC细胞表面 高表达抗原 |
PE |
8
✦
人T细胞亚群
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BB515 |
| CD4 |
辅助性T细胞表面抗原 |
BV421 |
| CD8 |
杀伤性T细胞 表面抗原 |
BV510 |
| CCR7 |
初始T细胞表面抗原 |
PE-CY7 |
| CD45RA |
初始T细胞表面抗原 |
APC |
9
✦
人Th细胞亚群
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞表面抗原 |
BB515 |
| CD4 |
辅助性T细胞 表面抗原 |
BV421 |
| IFN-g |
Th1胞内表型抗原 |
Percpcy5.5 |
| IL-4 |
Th2胞内表型抗原 |
PE |
| IL-17 |
Th17胞内表型抗原 |
AF647 |
| CD25 |
调节性T细胞\表面特征性抗原 |
BV605 |
| CD127 |
调节性T细胞 特异性低表达抗原 |
pe-cy7 |
10
✦
人CD8T亚群
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD45 |
白细胞 表面共同抗原 |
APC-CY7 |
| CD3 |
T淋巴细胞 表面抗原 |
BB515 |
| CD8 |
杀伤性T细胞 表面抗原 |
BV510 |
| IFN |
细胞功能Tc 细胞胞内抗原 |
Percpcy5.5 |
| Granzyme B |
细胞毒性Tc 细胞胞内抗原 |
PE |
| Perforin |
细胞毒性Tc 细胞胞内抗原 |
APC |
| PD-1 |
耗竭亚型Tc 细胞胞内抗原 |
BV560 |
| Ki-67 |
细胞周期 增殖核内抗原 |
PE-CY7 |
11
✦
人巨噬极化
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD11b |
髓系细胞表面抗原 |
FITC |
| CD68 |
巨噬细胞跨膜抗原 |
BV421 |
| CD86 |
巨噬细胞M1型 表面抗原 |
PE-CY7 |
| CD206 |
巨噬细胞M2型 表面抗原 |
APC |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
12
✦
人DC成熟
| 指标 |
指标解释 |
配色 |
| CD11b |
髓系细胞表面抗原 |
FIFC |
| CD11c |
DC细胞成熟标志 |
APC |
| HLA-DR |
DC细胞表面 高表达抗原 |
PE |
| CD80 |
DC细胞表面 共刺激分子 |
BV421 |
| CD86 |
DC细胞表面 共刺激分子 |
PE-CY7 |
| CD45 |
白细胞表面共同抗原 |
APC-CY7 |
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