《WB进阶攻略》：样本裂解_公司新闻

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人阅读发布时间：2024-02-21 10:35

在WB实验中，有很多因素都会影响wb条带质量。但蛋白提取这一步往往很容易被忽略。完整的蛋白提取步骤包括：样本处理和样本裂解。

在.pdf中，我们为大家介绍了不同样本的处理步骤，这一次，我们来讲讲样本裂解有哪些要点，帮助大家WB实验不踩坑

裂解方法

根据样本类型选择合适的裂解方法，如传代细胞比较容易发生裂解，用细胞刮刮取或胰酶消化之后，加入裂解液即可。如果是组织，因为其比较大块难裂解，就需要搭配相应的破碎组织的仪器，比较常用组织研磨仪。经典裂解方法如下：

经典裂解方法（细胞&组织）
裂解方法	仪器	使用特点
超声破碎法	Sonicator	超声波破碎细胞
反复冻融法	Freezer or dry ice methanol	反复冻融的过程利用冰晶的形成破碎细胞
液体匀浆法	Dounce homogenizer French press	利用狭窄的空间挤碎细胞和组织的悬液
研磨法	Mortar and pestle	主要是补充和强调动物组织动物样本用的比较多
机械法	Waring blender Polytron	主要是补充和强调动物组织动物样本用的比较多

裂解液的原理

上述裂解方法可单独使用，也可搭配裂解液一起使用。那么是否需要裂解液，则需要根据实验目的和样本种类进行判断。

裂解液里面的成分如：NP-40、Triton X-100可以帮助样本中的蛋白质进行更好的释放，下表中我们为大家列举了一些经典的裂解液（强度从低到高排列）：

经典裂解液
类型	特征/保存	成分
不含去污剂的可溶性蛋白裂解液	需要配合机械裂解液4℃，6个月	PBS cintaining: 5mM EDTA 0.02% Sodium Azide
非变性裂解液	保持蛋白的天然状态 4℃，6个月	20mT Tris Hcl pH 8.0 137mM Nacl 1% NP-40(Triton X-100) 2mM EDTA
RIPA变性裂解液	裂解核膜 4℃，6个月	50mT Tris Hcl pH 8.0 150mM Nacl 1% NP-40 0.5% sodium deoxycholate 0.1% SDS
变性去污剂	可从染色质中提取蛋白 RT，1年	1% SDS 5mM EDTA before use add： 10mM DTT or β-mercaptoethanol 15U/ml Dnase I

如何选择裂解液

Tips：

· 选择裂解缓冲液的主要考虑因素是确保所选抗体能够识别变性样品

· 含有SDS和其他离子去污剂的裂解缓冲液被认为具有最强的溶解能力，会变性蛋白但得率也最高；反之相对温和的不含去污剂的裂解液（Tris-HCL ,NP-40,Triton X-100）则会降低蛋白得率但能更好保持蛋白的性质

· 亚细胞组分更依赖于分离方法（梯度离心分离等）而非裂解液

· RIPA buffer适用于多种组分的蛋白提取（全细胞、膜蛋白以及核蛋白等），但它会破坏蛋白质与蛋白质的相互作用

贝茵莱裂解液

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