武汉贝茵莱一步法ELISA试剂盒以其高效、精准的特点，让我们能够在短短60分钟内完成整个实验流程。这其中，如果说样品的制备是实验成功的基础（具体攻略点击了解）那么，加样不仅关乎到实验结果的准确性，更是决定我们能否快速、高效完成整个实验流程的关键。

本期继续为大家带来武汉贝茵莱ELISA实验的精彩内容—加样步骤详解！深入探讨的加样步骤。

贝茵莱ELISA试剂盒操作步骤

 

 

ELISA加样操作

 

 

 

ELISA实验中一般需要6次加样，即标准品、样本、生物素抗体、酶标试剂、显色剂、终止液。

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样品的混匀：

加样前需充分混匀样品，避免样品中的成分分布不均，导致实验结果偏差。

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移液枪的校准：

确保移液枪已经定期校准，以保证吸取和加样的准确性。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致最后读数差别，因此避免仪器带来误差。

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控制加样量：

根据实验要求，精确控制加样量，避免过多或过少，以免影响实验结果。

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控制加样角度：

加样时避免加到孔壁上，以免样本无法充分接触孔底的抗体，导致实验结果不准确。建议45度，吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。

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控制加样速度：

加样时要保持稳定的速度，避免过快或过慢，以确保加样的均匀性和准确性。

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加样过程需小心：

在加样过程中，要小心操作，避免样品溅出，避免产生气泡，同时也要注意避免加样枪头反复吸取导致的样本污染。

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加样顺序和显色时间：

按照说明书的顺序进行加样操作，并确保显色时间一致，以保证实验结果的准确性和可比较性。

 

 

Q&A(仅从加样角度讨论)

 

 

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Q：同一个样本间各个复孔的读数存在显著性差异怎么办？

A：关键在于加样量和操作时间是否相同。可以从“校准移液器、标准化操作流程、确保加样量与时间相同”方面进行优化措施，从而有效降低同一个样本间各个复孔的读数差异，提高实验的准确性和可靠性。

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Q：阳性对照读数不正常怎么办？

A：加样时必须使用经过校准的移液器，并严格按照操作步骤进行。避免加样量过多或过少，以及加样时间过长或过短，有条件的应该考虑使用排枪。

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Q：血清本底浓度过高怎么办？

A：严格更换吸头：每次吸取不同样本或试剂时，务必更换新的吸头，确保“一样一吸头”，从而避免不同样本之间的交叉污染。

确保吸样准确：使用干吸头时，每次加样前应在血清中反复抽吸几次，至少三次，以确保吸头内部充分浸润血清，从而吸样准确，减少误差。

摇匀试剂：在使用滴瓶加样时，应先充分摇匀试剂，确保试剂的均匀性。

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Q：为什么实验的标准曲线和测定结果重复性差？

A：1. 孔间加样量不一致。需确保每次实验的操作条件、人员等因素尽可能一致。

2. 加样过快导致孔间污染。控制加样速度，以减少液体溅出或孔间污染的可能性。

3. 加错样本。复盘实验记录和过程，确定是否加错。

 

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