从入门到精通

Annexin V凋亡检测进阶完整指南

 细胞凋亡

 

细胞凋亡检测在生物医学研究中扮演着至关重要的角色，它有助于我们深入理解细胞死亡机制以及疾病发生发展的过程。在众多检测方法中，Annexin V凋亡检测因其高灵敏度、特异性、操作简便等优势而备受青睐。

从本期开始，在《从入门到精通——Annexin V凋亡检测进阶完整指南》中我们将逐步为大家带来相关的系列内容，希望能对屏幕前的你有所帮助。

 

 

PART 01Annexin V 凋亡检测原理

 

Annexin V凋亡检测的实验原理主要基于细胞凋亡过程中磷脂外翻的现象。具体来说，当细胞发生凋亡时，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）会翻转到细胞膜外侧，这一变化使得Annexin V能够特异性地结合到凋亡细胞的表面。

在实验中，我们使用荧光标记的Annexin V（如Annexin V-FITC）作为探针。当这个探针与凋亡细胞表面的PS结合时，会发出荧光信号。通过流式细胞仪或荧光显微镜等设备，我们可以检测并记录这些荧光信号，从而判断细胞是否发生了凋亡。

值得注意的是，正常存活的细胞表面不会外翻PS，因此不会与Annexin V-FITC结合，也不会发出荧光信号。这种特性使得Annexin V凋亡检测具有高特异性和准确性。

 

此外，为了更全面地了解细胞的凋亡状态，我们还可以结合其他核酸染料（如PI、7-AAD、DAPI等）进行联合染色。这些染料能够进入凋亡细胞内，与DNA结合并发出荧光信号，从而帮助我们区分凋亡早期和凋亡晚期的细胞。

 

 

 

PART 02各染核试剂介绍

 

PI

染色原理：荧光染料PI（碘化丙啶）它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。

膜通透性：否

检测通道：使用488 nm激发，用610/20 BP收集

能否检测早期细胞凋亡：能

缺点：不能区别晚期凋亡和坏死细胞

7-AAD

染色原理：7-AAD 是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的，可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD阴性为正常活力细胞。

膜通透性：否

检测通道：用488nm激发，用670/14BP收集

能否检测早期细胞凋亡：能

缺点：不能区别晚期凋亡和坏死细胞

DAPI

染色原理：DAPI可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

膜通透性：能

检测通道：用355nm激发，用440/40BP收集；也可用405nm激发，450/50BP收集

能否检测早期细胞凋亡：不能

缺点：强烈致癌

 

 

 

贝茵莱相关产品推荐